单靠临床表现不能诊断CMV感染,从临床标本中分离出病毒,同时抗体呈出4倍以上增加或持续抗体滴度升高,将有助于诊断.
一,病毒分离
最好用唾液,尿液,生殖道分泌物,乳汁和白细胞,接种到人的成纤维细胞内繁殖和分离,细胞病变效应(CPE)在1天或数周后出现,经固定和HE染色后可观察到巨细胞,核内有内包涵体,核周晕圈及嗜酸性胞浆内包涵体,很象“猫头鹰眼”(owl′s eye)亦可用单克隆或多克隆抗体的荧光染色等方法检查.
二,血清抗体检测
最常用的有补体结合试验(CF),间接免疫荧光试验(IIF),免疫酶试验(EIA),间接血凝试验(IHA)和放射免疫试验(RIA)等检测CMV-IgG和IgM抗体.当单份血清标本已确定既往有CMV感染时,应当立即留血清标本,以及间隔2周,4周,8周再留血清标本,结合病毒分离可作原发感染诊断.
三,DNA探针
已广泛应用于检测CMV,其中以32P标记的探针敏感性最高,对某些标本来说,杂交方法可能比病毒分离更敏感.
四,聚合酶链式反应(PCR)
(一)标本的采集及处理
采集的标本包括患者的血液,尿,以及腺体组织等.由全血制备的血沉棕黄层(buffy coats)可保存于-80℃;尿液标本可保存于液氮中.冻存标本应避免反复冻融.
尿液标本经2500r/min离心10min,以除去细胞碎片,收集上清液.由于尿液中含有PCR抑制剂,因此需用聚乙二醇(PEG6000)进行预处理:50μl尿上清与50μl 20%PEG6000和25μl 2mol/L NaCl混合,置冰浴中6h;15000r/min离心30min收集沉淀.再于6400r/min离心3min;尽可能吸去上清,将沉淀悬浮于蒸馏水中.该悬液可直接用于PCR扩增;扩增时应于100℃加热10min,迅速置冰浴中冷却.
温馨提示:
最好不要吃辛辣食物。禁忌烟酒。
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