一般来说，除湿三伏贴常选取的穴位在 3 - 5 个。
人体经络系统如同一个复杂的网络，连接着各个脏腑和组织。三伏天，外界阳气最为旺盛，此时在特定穴位贴上三伏贴，药物的有效成分能通过穴位渗透到经络之中，进而调节人体气血运行和脏腑功能。脾胃主运化水湿，肺主通调水道，肾主水，选取相关穴位能增强这些脏腑对水湿的代谢能力，达到除湿目的。
神阙穴位于肚脐中央，是人体重要的穴位之一，与人体诸经百脉相通，通过此处给药可调整人体阴阳平衡，促进水湿运化。足三里穴是足阳明胃经的主要穴位，能调节脾胃功能，增强脾胃对水湿的运化能力。丰隆穴为化痰要穴，可有效去除体内痰湿。阴陵泉穴属足太阴脾经，能健脾利湿，促进水湿排出体外。这些穴位相互配合，共同发挥除湿作用。
在使用除湿三伏贴时，要注意贴敷时间不宜过长，一般成人 2 - 4 小时，儿童 1 - 2 小时。贴敷期间避免食用生冷、油腻、辛辣等刺激性食物，保持皮肤清洁干燥。若贴敷部位出现红肿、瘙痒等不适症状，应及时取下三伏贴，并咨询医生。同时，三伏贴只是一种辅助养生方法，不能替代正规治疗，若有疾病应及时就医，遵医嘱进行治疗。
